КАТЕГОРИИ: Архитектура-(3434)Астрономия-(809)Биология-(7483)Биотехнологии-(1457)Военное дело-(14632)Высокие технологии-(1363)География-(913)Геология-(1438)Государство-(451)Демография-(1065)Дом-(47672)Журналистика и СМИ-(912)Изобретательство-(14524)Иностранные языки-(4268)Информатика-(17799)Искусство-(1338)История-(13644)Компьютеры-(11121)Косметика-(55)Кулинария-(373)Культура-(8427)Лингвистика-(374)Литература-(1642)Маркетинг-(23702)Математика-(16968)Машиностроение-(1700)Медицина-(12668)Менеджмент-(24684)Механика-(15423)Науковедение-(506)Образование-(11852)Охрана труда-(3308)Педагогика-(5571)Полиграфия-(1312)Политика-(7869)Право-(5454)Приборостроение-(1369)Программирование-(2801)Производство-(97182)Промышленность-(8706)Психология-(18388)Религия-(3217)Связь-(10668)Сельское хозяйство-(299)Социология-(6455)Спорт-(42831)Строительство-(4793)Торговля-(5050)Транспорт-(2929)Туризм-(1568)Физика-(3942)Философия-(17015)Финансы-(26596)Химия-(22929)Экология-(12095)Экономика-(9961)Электроника-(8441)Электротехника-(4623)Энергетика-(12629)Юриспруденция-(1492)Ядерная техника-(1748) |
Многоцветное окрашивание хромосом
Метод флюоресцентной гибридизации in situ Молекулярная цитогенетика Следующее революционное достижение молекулярной цитогенетики — метод флюоресцентной гибридизации in situ (Fluorescence In Situ Hybridization — FISH), обеспечивший прямую связь между микроскопом и секвенированием. Эта техника позволяет увидеть хромосомную локализацию специфических последовательностей ДНК с помощью микроскопа. Прогрессивность методики — в замене радиоактивного мечения проб ДНК и РНК, применяемого с 1969 г., на флюоресцентное. Флюоресцентные красители — мягкие и простые в употреблении, могут храниться неопределённо долго, дают высокое разрешение и позволяют одновременно исследовать несколько последовательностей ДНК. Появление FISH расширило возможности картирования генома, в частности идентификацию малых хромосомных аномалий. Метод FISH используют для упорядочивания ДНК-клонов и идентификации точек разрыва, оценки построенных карт, идентификации повреждённых генов в больших коллекциях картированных сегментов генома человека. Методика FISH легла в основу открытия импринтинга генов региона 15qll- 15ql3 (длинное плечо хромосомы 15) при синдромах Ангельмана и Прадера- Вилли. В лабораториях клинической цитогенетики FISH используют с диагностической и исследовательской целью. В настоящее время созданы коммерческие наборы проб, пригодные для решения различных задач, например для диагностики синдрома, обусловленного малой хромосомной аномалией, незаметной при обычном дифференциальном окрашивании. Исключительным примером является использование пробы для идентификации микроделеции хромосомы 17 при диагностике синдрома Смит-Магенис (необычное лицо, мышечная гипотония и задержка психомоторного развития).
Что ещё более важно, FISH сделала доступными для цитогенетического анализа ядра неделящихся клеток. Хромосомы идентифицируют простым подсчётом сигналов в каждом ядре. Изменение числа сигналов свидетельствует о произошедшей делеции или амплификации (множественном копировании) гена. Так, дупликация длиной 1 Mb — причина синдрома Шарко-Мари-Туга— может быть определена интерфазной FISH. Позиционные сдвиги сигналов выявляют структурные перестройки, такие как транслокации и инверсии. Последнее достижениее цитогенетических технологий — анализ многоцветно окрашенных хромосом. Новая методика, получившая название спектрального кариотипирования, или мультиплексной FISH (M-FISH), появилась в результате 3 новшеств. Во-первых, были созданы хромосом-специфические «краски»: коллекции последовательностей, выделенных из каждой хромосомы. Во-вторых, за счёт сочетания флюорохромов для каждой хромосомы получена своя 24-цветовая комбинация. В-третьих, для многоцветного анализа усовершенствована техника оптической микроскопии, системы фильтрации и отображения, позволяющие автоматически классифицировать каждый хромосомный сегмент. M-FISH обладает высокой эффективностью выявления транслокаций и других сложных аберраций, например, репликации регионов llq, 21q и 22q при остром миелоидном лейкозе (OMJI). Метод M-FISH позволяет идентифицировать многие ранее неизвестные перестройки хромосом, особенно их концов (субтеломерные делеции), которые достаточно часто (7-10%) встречаются среди пациентов с интеллектуальным дефицитом.
Дата добавления: 2015-06-04; Просмотров: 626; Нарушение авторских прав?; Мы поможем в написании вашей работы! Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет |