III. План практической работы

1. Учесть и обосновать заключение по РПГА, поставленной с целью обнаружения НВs-антигена, в диагностике гепатита В

Метод диагностики: вирусологический

Компоненты: вирусологический материал (исследуемая сыворотка больного для обнаружения НВs-антигена), антительный эритроцитарный диагностикум (содержащие эритроциты с адсорбированными на них антителами к НВs-антигену).

Постановка: В рабочую лунку вносят вирусологический материал (сыворотку больного) и антительный эритроцитарный диагностикум. Выдерживают при комнатной температуре в течение 40 мин.

Учет: Положительная реакция – осадок с неровными краями в виде красного зонтика. Отрицательная реакция- осадок с ровными краями в виде красной пуговки. Титр РПГА определяют по максимальному разведению, при котором наблюдается гемагглютинация (красный зонтик)

Заключение: Сыворотка больного содержит НВs-антиген, что свидетельствует об начальной стадии гепатита В.

2. Нарисовать схему лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции

А) серологическое исследование (выявление анти-ВИЧ-антител)

Б) вирусологическое исследование (обнаружение вирусных антигенов)

Сыворотки больных ВИЧ-1 и ВИЧ-2 содержат антитела ко всем вирусным белкам. Однако для подтверждения диагноза определяют антитела к белкам gp41, gp120, gp160, p24 у ВИЧ-1 и антитела к белкам gp36, gp105, gp140 у ВИЧ-2. ВИЧ антитела появляются через 2-4 недели после инфицирования и определяются на всех стадиях ВИЧ-инфекции. Для выявления специфических антител используют ИФА, для подтверждения диагноза ставится иммуноблотинг (иммуноблот, Western blot, вестерн-блот).

В более ранние сроки выявляются антигены ВИЧ. Наличие вирусемии определяют с помощью ПЦР- диагностики (качественное определение ДНК ВИЧ в мононуклеарах периферической крови). С помощью обратной ПЦР проводится количественное определение РНК ВИЧ-1 в крови, что позволяет прослеживать уровень вирусной репликации при естественном течении этого заболевания и осуществлять контроль за результатом противовирусного лечения. Метод выявления вируса в крови, лимффоцитах превосходит по информативности другие тесты, однако он трудоемок и дорог.

3. Учесть и обосновать заключение по результатам иммуноблотинга

Иммуноблоттинг (ИБ) — высокочувстви­тельный метод, основанный на сочетании электрофореза и ИФА (рис. 30). Смесь антигенов микроорганизма (родовых, видовых, групповых) разделяют на фракции, содержащие отдельные антигены с помощью электрофоре­за в полиакриламидном геле. Затем переносят его (блоттинг - от англ. blot, пятно) из геля на нитроцеллюлозную мембрану и проявляют с помощью ИФА. Фирмы выпускают такие полоски с «блоттами» антигенов. На эти полоски наносят сыворотку больного. Затем после инкубации отмывают от несвязавшихся антител больного и наносят сыворотку против иммуноглобулинов челове­ка, меченую ферментом. Образовавшийся на полоске комплексы антиген + антитело больно­го + антитело против Ig человека, меченое ферментом, выявляют до­бавлением субстрата и хромогена, изменяющих окраску под действием фермента. ИБ используют как диагностический метод при ВИЧ-инфекции, сифилисе, листериозе и других инфекциях.

Рис. 30 Схема иммуноблоттинга

Дата добавления: 2015-06-27