КАТЕГОРИИ: Архитектура-(3434)Астрономия-(809)Биология-(7483)Биотехнологии-(1457)Военное дело-(14632)Высокие технологии-(1363)География-(913)Геология-(1438)Государство-(451)Демография-(1065)Дом-(47672)Журналистика и СМИ-(912)Изобретательство-(14524)Иностранные языки-(4268)Информатика-(17799)Искусство-(1338)История-(13644)Компьютеры-(11121)Косметика-(55)Кулинария-(373)Культура-(8427)Лингвистика-(374)Литература-(1642)Маркетинг-(23702)Математика-(16968)Машиностроение-(1700)Медицина-(12668)Менеджмент-(24684)Механика-(15423)Науковедение-(506)Образование-(11852)Охрана труда-(3308)Педагогика-(5571)Полиграфия-(1312)Политика-(7869)Право-(5454)Приборостроение-(1369)Программирование-(2801)Производство-(97182)Промышленность-(8706)Психология-(18388)Религия-(3217)Связь-(10668)Сельское хозяйство-(299)Социология-(6455)Спорт-(42831)Строительство-(4793)Торговля-(5050)Транспорт-(2929)Туризм-(1568)Физика-(3942)Философия-(17015)Финансы-(26596)Химия-(22929)Экология-(12095)Экономика-(9961)Электроника-(8441)Электротехника-(4623)Энергетика-(12629)Юриспруденция-(1492)Ядерная техника-(1748) |
Учет на плотных средах
После инкубации засеянные среды вынимают из термостата и в них подсчитывают число колоний. Одновременно после сушки бюксов с навесками при 105 °С до постоянной массы определяют содержание абсолютно сухой почвы в 1 г анализируемой сырой почвы (см. 5.1.1). При подсчете колоний на богатых плотных питательных средах (МПА, МПА + сусло-агар, КАА, сусло-агар, среда Чапека, среда Эшби и т. д.) закрытые чашки Петри просматривают в проходящем свете и с внешней стороны колонии отмечают чернилами или тушью. Чтобы не пропустить мелкие колонии, чашки дополнительно просматривают под лупой. Желательно использовать специальный прибор с арифмометром. Число колоний на бедных средах (нитритный агар, «голодный» агар, агаризованный почвенный экстракт и т. д.) определяют под микроскопом (окуляр 10х и объектив 3х, в крайнем случае — окуляр 10х и объектив 8х). В чашках Петри сначала учитывают колонии в 100 полях зрения, затем определяют среднее арифметическое для одного поля зрения. Для определения числа колоний на всей чашке среднее число колоний в одном поле зрения умножают на коэффициент (К), который равен площади чашки Петри (Р), деленной на площадь поля зрения (р): Диаметр чашки Петри измеряют линейкой, а диаметр поля зрения — под микроскопом, используя для малых увеличений миллиметровую бумагу, а для больших (объективы 40х и 90х) — объективный микрометр. Подсчитав при поверхностном посеве число колоний на чашке, находят содержание клеток в 1 мл соответствующего разведения, умножая число колоний на 20, так как посеяно было 0,05 мл суспензии. Чтобы определить количество клеток в 1 г сырой почвы, их содержание в 1 мл умножают на степень разведения (103 , 104,105 и т. д.).
Дня учета микроорганизмов в 1 г абсолютно сухой почвы число клеток в 1 г сырой почвы делят на количество абсолютно сухой почвы, содержащейся в 1 г сырой почвы. Пример расчета. Установлено, что при поверхностном посеве почвенной суспензии из разведения 10-3 число колонии на чашке равно 52; влажность почвы — 25%; при такой влажности 1 г сырой почвы содержит 0,75 г абсолютно сухой почвы. Число клеток в 1 г абсолютно сухой почвы (х) определяют следующим образом: При глубинном посеве число колоний в 1 г абсолютно сухой почвы подсчитывают так же, но не умножают на 20, так как при высеве используют 1 мл суспензии, а не 0,05 мл. Подсчет желательно проводить и в пересчете на 1 г гумуса или на 1 мг азота. В этих случаях параллельно определяют содержание гумуса или азота в почве. Учет микроорганизмов на МПА. Проводят его визуально на 4-й день после посева. При наличии колоний В. Mycoides количество микроорганизмов определяют на 2-й или 3-й день. После подсчета всех колонии на чашке их группируют по культуральным признакам и определяют роды (а иногда и виды) микроорганизмов. Учет микроорганизмов на КАА. Колонии на таком агаре подсчитывают на 7—10-й день. Из общего количества микроорганизмов отдельно учитывают: пигментированные формы— жёлтые и другие микобактерии, образующие мелкие куполообразные колонии, актиномицеты (Streprtomyces). Отмечают окраску колонии, воздушного мицелия (серая, белая, зеленовато-серая, розовая) и среды (выделение пигмента в субстрат). Для описания пигментации можно использовать специальные пособия по определению цвета. При идентификации актиномицетов описывают консистенция колонии (плотные, кожистые, рыхлые), поверхность (мучнистая, бархатистая) и запах (землистый, эфирный, фруктовый). Учет микроорганизмов на бедной среде — нитритном агаре ( см. 10.2-1). Колонии определяют под микроскопом на 6 — 7-й день культивирования. Если на колониях появляются Рrotozoa, об их наличии судят по образованию цист, которые хорошо просматриваются при малом увеличении объектива. Подсчёт проводят после 6 сут инкубации.
По культуральным признакам выделяют следующие роды: · Nocardia — колонии пастообразные, слизистые, сухие, по переферии образуется мицелиальная зона или мицелиальный ободок ( рис. 27. а), состоящий из субстратного и надсубстратного мицелия. В центре колонии чаще преобладают пигментированные гифы, состоящие из палочковидных и кокковидных клеток. Колонии бесцветные, лимонно-желтые, желтые, розовые, красные;
· Mycobacterium (см. 6.1.3); · Arthrobacter - колонии мелкие, плоские или слегка приподнятые, бесцветные, иногда с зеленовато-желтым оттенком. По их периферии образуется кружевной или складчатый ободок (рис. 27. б). У отдельных представителей края колоний зарублённые. Молодая культура состоит из мелких искривлённых палочек, затем они довольно быстро распадаются, чаще — на кокковидные клетки; · Микромопоспоры — их компактный мицелий полностью погружен в субстрат и едва заметен под микроскопом. На поверхности агара кольцеобразно или радиально располагаются бесцветные или темноокрашенные комочки слизи, содержащие споры; · Bactoderma — колонии мелкие в виде розоватой или белой бархатистой пленки; и центре она — складчатая, а по периферии — стекловидная; край колоний волнистый или лопастный. Учет на среде Эшби. Проводят на 5—6-е сут. Отдельно подсчитывают колонии азотобактера— плоские, слизистые, мажущейся консистенции, диаметром 5—10 мм, и олигонитрофильные бактерии — мелкие, слизистые, бесцветные колонии. Олигонитрофильные дрожжи — Lipomyces — образуют слизистые молочно-белые колонии. Учет грибов на агаровых средах. Колонии грибов ил сусло-aгape или среде Чапека подсчитывают через 2 сут инкубации. После 7 сут определяют родовой состав. В ночке часто встречаются грибы родов: Mucor, Rhizopux, Рenicilliuт, Asperguillus, Alternaria, Fusarium, Macrosporium, Chaetomium, Cephalosporum, Phoma, Coremium, Trichoderma, Trichothecium, Stachybotrys.
Дата добавления: 2014-01-04; Просмотров: 997; Нарушение авторских прав?; Мы поможем в написании вашей работы! Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет |